伤寒杆菌检测实验方法的研讨

　　伤寒是由伤寒杆菌经消化道侵入而引起的急性传染病，遍布于世界各地，以热带、亚热带地区为多见，在我国和其他发展中国家仍是一种常见的传染病.。伤寒杆菌经口腔到消化道侵害小肠粘膜而入血，可造成伤寒杆菌菌血症。伤寒病常称“伤寒热”， 其症状包括高烧，可达39°至40°C，其他症状有腹痛、严重腹泻、头痛、身体出现玫瑰色斑等。其中肠道出血或穿孔是其最严重的并发症，其传染途径为粪口途径，传染力很高。所以，伤寒的早期诊断十分重要。现对我中心使用的伤寒杆菌检测实验方法研讨如下。

　　1材料和方法

　　1.1材料：选取送检伤寒患者137例，其中男性77例，女性60例。年龄8—63岁，平均38岁。

　　1.2检测方法：

　　1.2.1血清学检测：肥达试验是临床上常用于辅助诊断伤寒的传统方法。其原理是用伤寒杆菌的菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原以及副伤寒甲、乙、丙菌液与稀释的待测血清反应，根据凝集效价判断血清中有无伤寒杆菌的抗体。早期肥达试验需要急性期和大约间隔10天的康复期血清，两份标本之间抗O抗体或抗H抗体滴度升高4倍，更有诊断意义。伤寒杆菌的 O抗原与A群、B群沙门氏菌有部分相同抗原，与甲、乙两种副伤寒杆菌有一定的交叉反应，因此，肥达反应诊断伤寒杆菌常出现假阳性，特异性差，敏感性低，而且抗原抗体结合出现凝集沉淀常需要20 h以上。

　　1.2.2免疫学检测：①酶联免疫吸咐试验(ELISA)：根据抗原或抗体特异性免疫反应原理设计，将已知的抗原或抗体结合在某种固相载体上，以辣根过氧化酶为指示剂，标记在另一种抗原或抗体上，加入酶作用底物，酶与底物发生反应后，底物显色，根据底物显色的深浅定性或定量地检测样本中的抗体或抗原。②浸染试验(Dipstick assay)：又称快速试纸法，是近些年发展起来的一种用胶体金作指示剂的快速诊断方法。基本原理是先将特异性的抗原或单克隆抗体固定于试纸条(硝酸纤维薄膜)的一端，检测时将试纸条的另一端浸入待测样品，由于毛细管作用，样品液向前移动，如待测样品中含有相应的抗体或抗原，则当样品液移至固定有抗原或抗体区时会发生特异性结合，在显色系统的作用下，该区域出现一定的颜色。此法具有操作简单，不需任何仪器，20 min即能报告结果，适合现场查病时使用。浸染试验在特异性、敏感性、简单、快速方面优于常规方法。

　　1.2.3聚合酶链反应(PCR)：PCR是一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在模板DNA、引物和脱氧核糖核酸存在及DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增。它由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成，是现阶段检测伤寒杆菌的最快速准确的方法。①套式聚合酶链反应：又称二次PCR，在这种技术中，首先用一对外引物进行第一轮PCR，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对引物再次扩增。②一次PCR：只设计一对引物用于PCR即完成检测，但一次PCR检测临床血标本容易受到血中大量存在的外周单个核细胞DNA非特异性扩增的影响而使敏感性降低。③多重PCR：多重PCR是在同一个反应管中同时完成多个不同基因扩增的PCR。(4)免疫磁珠分离PCR：免疫磁珠就是将直径0.05 μl～4 μl具有超顺磁性的微粒表面经化学修饰，使之与特异性抗体牢固结合，成为能与特异性抗原结合且有磁性的磁珠。

　　2结果

　　经过我中心对伤寒杆菌检测，132例患者得到了准确的诊断，并且进行了对症治疗;5例患者检测结果不准确，仍需临床进一步观察再送检确诊。

　　3讨论

　　伤寒患者的诊断主要依据病原学的实验室诊断，由于抗生素的广泛应用，导致血培养时伤寒杆菌的检出率明显降低，常规血清学检测患者血清中的特异性抗体，其特异性和敏感性均存在一定的问题，从而影响检测结果的准确性和可靠性。肥达氏试验早期阳性率低，需到第3周、第4周才可达70%，实际上只有回顾性诊断价值，且假阳性较高。免疫学检测的方法具有灵敏度高、特异性好，反应时间短，操作简便，结果易于判断等特点，较肥达氏试验特异、敏感和快速，且价格低廉，一般实验室都能开展，易于普及推广，适用于伤寒的早期诊断，具有较高的临床价值。PCR技术检测伤寒杆菌的方法敏感度更高，但是这类方法操作麻烦、对环境要求较高，且价格昂贵，很难普及。

　　检测伤寒杆菌的方法很多，各有其优缺点，伤寒杆菌的检测方法将向早期、快速、准确、灵敏、特异等方向发展，特别是免疫学检测方法、PCR等现代分子生物学技术的联用，会使伤寒杆菌的检测方法日趋成熟，为临床诊断提供更加快速准确的科学诊断依据。