我国转基因生物检测技术的应用现状

　　随着我国科学技术的发展，转基因生物在我国食品中得到了应用，由于其生物安全管理技术性较强，需要我们对我国的转基因生物检测技术进行进一步的研究，为转基因生物检测的科学性和技术性奠定基础。当前，在我国的转基因生物应用过程中，我国常见的转基因生物检测技术主要有PRC技术、DNA提取技术等，正规论文在本文中，我们将对当前我国转基因生物检测技术的主要内容进行简要介绍，以期为我国未来转基因生物检测技术的发展奠定良好的技术基础。

　　《福建农林大学学报》(哲学社会科学版)主要报道有关农业、农村和农民问题的最新研究成果，兼顾刊载其他社会科学方面的学术论文，为我国经济和社会发展以及高等农业教育改革服务。获奖情况：2002年获中国人文社科学报优秀编辑质量社科学报、2003年获第三届全国理工农医院校优秀期刊奖。

　　转基因技术对于提高作物产量、改善作物品质方面做出了巨大贡献，也缓解了国际上的粮食危机。随着转基因技术的发展，转基因生物检测问题在国内外已经引起极大的关注，不同领域的专家都从自己的专业角度对这个问题进行了很多研究，主要通过技术层面来分析转基因生物的安全性问题。下面让我们共同对国内外转基因生物检测技术的发展现状进行探索。

　　转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学，DNA片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行重组，再从重组体中进行数代的人工选育，从而获得具有稳定表现特定的遗传性状的个体。当前应用较为广泛的转基因生物检测技术主要有如下几种：

　　一、普通PCR聚合酶链式反应

　　PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

　　二、实时荧光PCR技术

　　实时荧光PCR法是目前最有发展前途的定量检测方法，也是目前最适合出入境检验检疫的检测技术之一。所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光集团，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该方法可以有效提高检测的准确性和灵敏度。它既能做定性检测，加入标准品也能做定量检测。

　　三、DNA芯片检测技术

　　DNA芯片检测的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。

　　DNA提取的主要方法有如下几种：

　　1、浓盐法

　　利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳提取化钠抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使其乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿---异醇法除去蛋白。两种方法比较，后种方法使核酸降解可能少一些.。除此之外，还可以用稀盐酸溶液提取DNA 时，加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂，通常用15MNaCL，0.015M柠檬钠，并称SSC溶液，提取DNA。

　　2、阴离子去污剂法

　　用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA 。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA。

　　3、苯酚抽提法

　　苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是可以使提取的DNA保持天然状态。

　　4、水抽提法

　　水抽提法主要是利用核算溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液，在上清液中加入固体氯化钠调节至2.6M，加入两倍体积的百分之九十五乙醇，立即用搅拌法搅出，然后分别用百分之六十、百分之八十和百分之九十五的乙醇以及丙酮洗涤，最后在空气中干燥，既可以得到DNA样品，用这种方法提取的DNA蛋白质含量较高，因此一般不会使用。如果为了去除蛋白可将此法进行改良，在提取的过程中加入SDS。

　　四、结语

　　随着科学技术的发展，转基因生物极大缓解了我国的粮食危机。综上所述，国外转基因生物检测技术已经进入发展的成熟期，取得了惊人的成果，我们应加强与国外的技术合作和交流，建立健全转基因生物检测管理体系，加大对硬件设施的投入，加快检测技术的研发和推广，从而完善我国转基因生物检测相关法律，并促进我国转基因生物事业的发展。