羊用采精器的运用思考

本文作者：王公金、徐小波、于建宁、陈哲、潘孝青 单位：江苏省农业科学院畜牧研究所

材料与方法

1材料

(1)器材与药品试剂主要试验器材:普通硅胶管(外径26mm，壁厚3mm);医用无毒天然硅胶管(外径19mm，内径11mm，壁厚4mm;执行标准:Q/STXI－2004);人用天然胶乳橡胶避孕套［简称避孕套，超薄型，型号规格:(52±2)mm］;普通生物显微镜，保温瓶(0．5～1．0L);载玻片与盖玻片;输精枪(不锈钢或玻璃);全套常规假阴道采精器。主要药品试剂:海绵阴道栓和氯前列烯醇为上海计划生育研究所产品;促卵泡素(FSH)、孕马血清促性腺激素(PMSG)和促黄体素释放激素A3(LHRH－A3)均为宁波第二激素厂产品;PVP30(AR)、柠檬酸三钠(AR)、葡萄糖(AR)、青霉素(医用针剂)、链霉素(医用针剂)、70%乙醇(AR)、生理盐水(兽用)以及凡士林等不限生产商，随意采购;卵黄液(临用前从新鲜鸡蛋中分离)。

(2)试验地点与试验动物本项研究主要在南京市六合区竹镇镇江苏省农业科学院实验羊场、溧阳养羊合作社羊场、浙江湖州练市镇志盛羊场和江苏丘陵地区镇江农业科学研究所附属的茅山镇江市农牧科技示范园内羊场实施。试验羊群(♀、♂)群体数量达3000只，涉及种群为波尔山羊、波杂山羊、徐淮白山羊、杜泊绵羊、杜湖和杜寒杂交F1代绵羊、湖羊、小尾寒羊(年龄8月龄至4周岁，体重≥30kg)，其中母羊约2500只，公羊约500只。所有试验羊群均按照常规舍饲模式饲养管理。

2方法

(1)内置式采精器简易制作与装配制作方法:将普通硅胶管剪切成10或12cm长度管段作为假阴道套管(简称套管)，并在距一端1．3cm处环绕外表面刻出深度为1mm的凹槽。取医用无毒天然硅胶管剪取成10cm或12cm管段作为假阴道内衬管(简称内衬管)，将套管和内衬管清洗干净后按常规高温消毒方法消毒，备用。将避孕套数只完全展开，置于适量70%乙醇溶液中浸泡、漂洗数次，以除去其内外表面涂敷的油渍，然后于50℃蒸馏水中反复漂洗，最后置于盛有50mL含双抗(160万单位青霉素和80万单位链霉素)生理盐水的具塞塑料试管中保存，备用。装配方法从生理盐水浸泡液中取出避孕套，挤压出套内大部分生理盐水，尔后将内衬管装入避孕套开口端，使内衬管一端开口与避孕套开口端平齐，形成内衬管和避孕套组合体。将组合体装入套管内腔中，使组合体开口端与带有外表面凹槽的套管开口端保持一致方向，并使组合体暴露出套管内腔外约2cm长度，然后将组合体开口端内腔向外翻卷，套在套管外表面上，最后用橡皮筋在套管圆柱体外壁凹槽处扎紧组合体，并在套管端口橡皮筋插入1枚回形针(其顶端与套管开口端平齐)，装配成一套简易的羊用内置式采精器装置，保持清洁，备用。

(2)采精操作方法与步骤在内置式采精器试验组(简称内置采精组)中，将装配好的简易内置式采精器开口用橡皮塞封住，整体浸入30～40℃温水中保温片刻，取出后除去橡皮塞，并在其开口处及深达处23cm内腔和套管另一端外表面涂上少许凡士林。在羊舍内选择1只发情母羊或未发情的经产母羊(四肢健壮，体型中等，体重≥25kg)作为台羊，在自然站立保定情况下，清洗其外阴部，手持采精器装置(开口端朝外)推入母羊阴道内，使采精器开口端处于台羊阴道口内深约1cm为止。选择拟采精种公羊与已置入采精器的台羊，在其保定或自由活动情况下与公羊自然交配。一般情况下，公羊与发情台羊交配不需要保定，而未发情台羊需要在保定状态下进行。当观察到公羊爬跨台羊，并完成典型射精动作后，立即隔离公羊，保定被交配后的台羊，用带手套的食指和拇指探入台羊阴道内抽出系在采精器端口外侧的回形针，连带取出该采精装置。从采精器套管上剥离出组合体，直立状态下从组合体开口端加入2mL生理盐水，尔后从避孕套上抽出内衬管，封闭避孕套开口端，轻轻上下翻转数次，混匀避孕套内精液，进而保持开口端向上垂直片刻，使避孕套内精液汇集于储精囊内。量取避孕套内精液体积，取少许稀释精液于载玻片上，压上盖玻片，置生物显微镜上观察精子活力和密度，以便进一步稀释和冷藏处理，制备人工授精工作液。为了比较本内置式采精器与常规假阴道采精器两者采精操作优缺点，本研究另外设置了常规假阴道采精试验组(简称常规采精组)，采精操作实施过程中均使用相同的公羊和台羊，其采集精液稀释、品质鉴定方法与内置式采精器相同。上述采精操作于一年四季，分别在使用发情台羊或未发情台羊、室内或露天、白昼或夜晚(有光照或无光照)以及雨雪等条件下进行，由采精技术人员和随机选择的无采精操作经验人员实施，分别统计在各种环境条件下的采精效果(持续时间、难易以及成功率等)，综合检验2种采精方式的操作效果。

(3)简易采精技术在同期发情与人工授精中的应用在2007—2011年5年期间春季和秋季配种季节，分别对大、中、小型山羊和绵羊养殖场舍饲母羊群进行了分期分批同期发情技术推广示范。其间，分别利用内置式采精器和常规假阴道采精器采集波尔山羊、当地白山羊、杜泊绵羊、杂交杜湖绵羊以及湖羊种公羊精液，采用石永忠［1］和聂晓伟等［8］方法制备精液工作液，分别进行相同品种发情母羊人工授精，并于配种后观察记录妊娠率(以配种后2个月内，即3个发情周期内未见返情者判定为妊娠，反之判定为未妊娠)。统计评价2种方式采集精液的配种效果。

结果与分析

1不同操作人员和动物品种采精效果比较

经5年来在全省大、中、小型羊场现场对江苏现有山羊和绵羊种群采精示范比较试验证明，对于任一品种羊群而言，未经采精技术培训人员和经过专门采精技术训练的专门采精员在良好环境和辅助设施条件下使用内置式采精器采精成功率未显示出明显差异，均达到极高的采精成功率(93．1%以上)。而两者使用传统采精器则表现出显著差异，采精成功率明显下降，且未经专门采精技术培训人员使用传统采精器采精成功率显著低于专门采精员(表1)。与传统采精器相比较，上述结果证明内置式采精器具有具有明显的优势，基本不存在对采精操作技术(技巧)的依赖性，易于掌握使用，达到高效采精目的。

2不同环境气候和设施条件下2种采精方法采精效果综合评价

根据表2所列2种采精装置使用评估数据分析，本羊用内置式采精器装置在12项评价指标中，除采精量和采精密度2项没有差异外，其余10项评价指标［装置结构特点、制造成本、操作人员技术水平要求、安装调试耗时、发情台羊需要与否、采精公羊调教程度、操作程序简便性、应激反应、环境和设施条件限制(光照、温度以及室外雨雪等气候)依赖性以及最佳条件下采精成功率］均显著优于传统假阴道采精器。对于内置式采精器而言，利用未发情的经产母羊亦可轻松实现采精。在此情况下，传统采精器是较难完成采精的。内置式采精器采精过程基本是在自然本交过程中实现的，因此只要种公羊具备正常本交能力，即可成功采精，相比之下，利用传统采精器采集未调教公羊精液是非常困难的。利用传统采精装置采精效率往往在很大程度上依赖于操作环境和设施条件优劣，而内置式采精器采精操作基本上不受环境和设施条件限制，甚至可在无光照、露天雨雪和低温等环境气候条件下成功采精，特别适于在基层羊养殖场简陋条件下广泛推广应用。显然，由于内置式采精器采精过程是在模拟自然本交的过程中完成的，故种畜和台羊一般不会出现应激反应，操作安全性也较高。

3同期发情与人工授精的受胎率

采用内置式采精器和常规假阴道采精器采集的精液精子密度和活力没有发现任何区别，2种采精途径获得的精液采用相同的精液稀释方法制备授精工作液，共进行了30余批次(30～100只/批)同期发情山羊和绵羊人工授精，不同来源的精液工作液分别对任一相应品种同期发情山羊或绵羊母羊群发情15h后一次性人工授精处理。经统计分析表明，在发情后2个月(3个发情周期)内所有母羊群妊娠率为71．2%～82．1%，对于同一种群母羊而言，不同来源的精液输精后妊娠率未表现出显著差异。这说明对于诸种山羊和绵羊种群而言，使用内置式采精器和传统的假阴道采精器获得的精液品质相互间没有差别，均可相互替代推广应用于山羊和绵羊繁育科研和生产领域。

小结与讨论

本文介绍的内置式采精装置可以在基层羊场简陋条件下全天候使用，如露天雨雪环境、环境温度较低以及晚上光照条件较差甚至黑暗条件下，皆可实施采精操作，整个操作过程基本不依赖于采精技巧水平。理论上讲，只要种公畜具有正常本交能力，即可达到成功采精的目的。相比之下，传统采精器成功采精与否则往往依赖于操作人员采精技术(技巧)水平发挥状态，这体现了内置式采精器独特的“傻瓜式”采精操作特点。在规模化养羊产业发展过程中，该套内置式采精装置及其方法适于与同期发情和人工授精技术相结合，有效地解决种公畜基因资源的高效和合理利用难题，可望通过中试试验进一步改进与完善，广泛应用于养羊业科研与生产领域。在将内置式采精器安装于台羊阴道内时偶尔会发生安装困难或安装后易于脱落等意外现象。出现该类现象的主要原因是台羊选择不当，一般来讲要尽可能选择经产母羊或发情母羊作为台羊，其阴道收缩和扩张状况良好，这样就不会发生安装困难或脱落问题。如果在采精操作现场没有发情母羊的情况下，应尽可能选择体型较大的山羊或绵羊作为台羊，这样采精器安装比较容易，也不会伤害母羊阴道内壁，采精之际最好在人工保定状态下进行，以确保采精成功。

一些缺乏本交经验和未经调教的种羊采精过程中会出现爬跨后阴茎不能正确插入已装入采精器的台羊阴道的现象。解决的办法是待公畜爬跨后伸出阴茎时采精人员可用手轻轻地在其包皮囊处把握，辅助调整阴茎伸出方向，使其对准台羊阴道口，从而成功导入，射精。对于那些体型较小的公畜采精时，应适当利用地势高低环境条件，将台羊保定于较低处，引导公畜处于地势较高处爬跨，通常易于采精成功。