2021-4-10 | 药学毕业论文
一、方法与结果
1、植物形态
多年生草本，高30~80cm。开花植株鳞茎直径大多在1cm以上。叶对生，有的中部兼3~4枚轮生或散生，条形至条状披针形，长5~10cm，宽3~7?~12?mm，先端有的稍弯曲。花单朵，每花有3枚叶状苞片，苞片先端有时梢弯曲，但不卷曲；花被片6，长3~4cm，绿黄色，在开花后期颜色会略有加深，无方格斑，通常仅在花被片先端近两侧边缘有紫色斑带；外轮3片狭倒卵状矩圆形，宽9~12mm，先端浑圆；内轮3片近匙形，上部宽12~17mm，基部宽3~5mm，先端骤凸而钝，蜜腺窝几不凸出或稍凸出；花药近基着，花丝通常具小乳突；花柱分裂部分长3~4mm。蒴果长1.8~2.5cm，棱上的狭翅宽0.5~2mm。花期5~6月，果期6~7月。
1、性状鉴定照
2010年版中国药典川贝母项下性状及附录Ⅱ项下药材、饮片取样法和检定通则进行。
2、显微鉴定照
2010年版中国药典川贝母项下鉴别及附录Ⅱ项下显微鉴别法进行。不同品种来源的川贝母显微特征存在差异：暗紫贝母?松贝、青贝?垂周壁可见细小点状角质栓，可见螺纹或环纹导管；各种规格太白贝母均无角质栓，并偶见网纹导管。
3、浸出物测定
按照2010年版中国药典一部附录XA项下水溶性浸出物测定法的热浸法和醇溶性浸出物测定法的热浸法进行测定。
4、总皂苷含量测定各取样品粉末约5.0g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇150mL回流提取8h，回收浓缩至30mL，冷却，加入乙醚100mL混匀，密塞，静置过夜，倾出上清液，沉淀用乙醚20mL洗涤后用60mL甲醇加热溶解，用干燥滤器滤过，滤液再加入乙醚100mL，密塞，静置过夜，倾出上清液，用干燥滤器滤于烧杯中，挥干大部分溶剂，然后转移至称量瓶中，于50oС下在干燥箱中干燥至恒重，称重，得样品中皂苷的含量。
5、总生物碱含量测定
（1）对照品溶液的制备：取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1mL含0.80mg的溶液，即得。
（2）供试品溶液的制备：取样品粉末?过三号筛?约2.0g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加浓氨试液3mL，浸润1h，加三氯甲烷-甲醇?4:1?混合溶液40mL，置65~70oС水浴加热回流4h，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇?4:1?混合溶液洗涤药渣2~3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇混合溶液至刻度，摇匀，得供试品三氯甲烷-甲醇溶液。精密量取25.0mL，置100mL锥形瓶中，水浴上挥干溶剂，加入氯仿20.0mL溶解，加水15.0mL，密塞，剧烈振摇3min后，转移至分液漏斗中，放置10min。分取下层三氯甲烷液，过滤，即得。
（3）测定法：精密吸取三氯甲烷液10mL，置25mL量瓶中，精密加水5mL、再精密加0.04%溴钾酚绿缓冲液2mL，密塞，超声3min，剧烈振摇后，转移至分液漏斗中，放置30min。分取三氯甲烷层，过滤，精密吸取三氯甲烷液5.0mL，置已加入0.001mol/L氢氧化钾无水乙醇溶液1.0mL的10mL量瓶中，摇匀，以摇匀的三氯甲烷?5.0mL?+0.001mol/L氢氧化钾无水乙醇溶液?1.0mL?为空白，照紫外可见分光光度法，在618nm的波长处测定吸光度。计算未水解样品中生物碱含量，按下面公式计算药材中生物碱的含量：生物碱含量=未水解测得的生物碱量/样品重量。
（4）标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL，置25mL量瓶中，分别补加三氯甲烷至10mL，按“2.6.3”项下方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=1.6802X+0.0002，r=0.9991。
（5）生物碱苷的含量测定：另精密量取供试品三氯甲烷-甲醇溶液25.0mL，置100mL锥形瓶中，挥干溶剂，加入0.5mol/L的硫酸溶液10.0mL溶解，于沸水上水浴水解10h，冷却后加入2.0mol/L的氢氧化钠溶液4.5mL，浓氨水1mL调节pH值至碱性，用三氯甲烷萃取3次，每次8.0mL，合并三氯甲烷层至25.0mL量瓶中并用三氯甲烷定容至刻度，用20mL蒸馏水洗涤三氯甲烷层，转移至分液漏斗中，放置30min。分取下层三氯甲烷液，过滤，精密吸取三氯甲烷液5~10mL，置25mL容量瓶中，分别补加三氯甲烷至10.0mL，精密加水5mL、再精密加0.04%溴钾酚绿缓冲液2mL，密塞，超声3min，剧烈振摇后，转移至分液漏斗中，放置30min。分取三氯甲烷层，过滤，精密吸取三氯甲烷液5.0mL，置已加入0.001mol/L氢氧化钾无水乙醇溶液1.0mL的10mL量瓶中，摇匀，以摇匀的三氯甲烷?5.0mL?+0.001mol/L氢氧化钾无水乙醇溶液?1.0mL?为空白，照紫外可见分光光度法，在618nm的波长处测定吸光度。计算水解后样品中生物碱含量，计算药材中生物碱苷的含量：生物碱苷含量=1.379×［?水解后测得的生物碱量未水解测得的生物碱量?/样品重量］。
二、结论
太白贝母栽培品与野生品相比，前者开花期植株生长高度较整齐，后者开花期植株高矮差距大；野生鳞茎较光洁，栽培品体表欠光滑，基部隘缩。显微特征上各种商品规格太白贝母均无角质栓，与李萍等研究结果一致，均符合2010年版中国药典一部川贝母鉴别项下的规定。太白贝母水溶性浸出物总体略高于暗紫贝母，部分商品规格太白贝母水溶性浸出物含量显著高于暗紫贝母。水溶性浸出物结果表明，暗紫贝母的含量与其大小成反比，即松贝明显高于青贝；而太白贝母的含量与其大小成正比，即花生大贝、大尖等较大者明显高于松尖、小尖等。鉴于川贝母水溶性浸出物含量明显高于醇溶性浸出物含量，且水溶性浸出物为其重要的活性部位之一，因此有必要增加川贝母药材的常规理化试验项目，加强药材综合质量控制，建议2015年版中国药典增加川贝母水溶性浸出物的含量限度。通过本试验结果，其限度建议为川贝母的水溶性浸出物?热浸法?不得少于9.0%。
三、讨论
目前研究表明，川贝母皂苷具有显著的镇咳、祛痰等生物活性，为其主要的有效部位之一。总皂苷的含量无显著性差异，含量范围较为稳定，可作为川贝母质量控制的方法之一。因此皂苷类是否更能代表川贝母的药效特色，进而在选择川贝母“指标成分”时加以足够的重视，都是值得思考的。但与赵德永等研究结果不一致，可能为品种、产地、环境因素、采收期、生长年限等原因所致，故需结合更多样本对川贝母总皂苷含量的评价进行深入研究。传统认为，生物碱是川贝母的主要有效成分之一，是贝母类药材及成药的常用检测指标，松贝是川贝母中品质最佳的品种，其生物碱含量按理应较高。而本试验的测定结果却表明，太白贝母栽培品各规格均显著高于松贝，该测定结果与以往文献研究结果相吻合，表明太白贝母所具有的含较高总生物碱的特性是其特有的生物学特性。生物碱含量随药材的大小增加而增加，但生物碱苷、总生物碱含量随药材的大小增加反而有下降的趋势，可能与太白贝母的生长年限有关，因太白贝母鳞茎的产量则是随着生长年限的增加而增加、生物碱含量随生长年限先升高而降低。这一结果意味着，能代表川贝母商品规格的药效特色不仅有生物碱类成分，而且可能是其他类型成分的综合作用，需结合药理、药效和临床应用来对其进行进一步的研究。太白贝母所表现出的浸出物含量、总皂苷含量、生物碱含量与暗紫贝母明显相似并高于暗紫贝母，为太白贝母可完全代替川贝母提供了可靠的物质基础。川贝母药材传统以松贝为优，多以野生药材入药，但从本实验的研究数据来看，在太白贝母列入川贝母后，传统的川贝母“以松贝为优”的评价有待一步探讨。
作者：沈力 周浓 付绍智 易东阳 贾晗 陈洪源 吴应梅 单位：重庆三峡医药高等专科学校 重庆三峡学院生命科学与工程学院