2021-4-9 | 动物医学论文
材料与方法
1.试验动物与仪器：取健康湛江鸡１０只，体质量（１５±０２）ｋｇ，日龄（１１０±５）ｄ。主要仪器为活体微循环观察显微镜（广州启跃光电仪器有限公司，增设底部投射光源）。
2.方法：
1）胸腺的血管观察：将鸡窒息处死，静置１ｈ，待血液在体内凝固。将颈部皮肤从腹侧正中划开，暴露胸腺，整体泡入体积分数为２０％甲醛中固定１ｄ后，血液凝固呈黑色，解剖观察颈部血管走向及供应胸腺的血管。
2）活体观察胸腺微循环状态：试验动物称质量。颈部、胸部去毛，消毒，保定，颈部中线切开皮肤，找到胸腺，将颈部皮肤固定在特制手术台上，涂以镜油，增设底部光源，在微循环观察仪下观察血管走向，血流状态等。观察过程中用３７℃林格氏液保温保湿。
3）墨汁灌注透明标本制作：灌注液：质量浓度为００５ｇ／ｍＬ的明胶墨汁（加入体积分数为２％的甲醛）。动静脉透明标本制作：活体观察结束后，在胸腔入口从颈总动脉和静脉灌入含抗凝剂的生理盐水冲洗血管，再灌入１０ｍＬ体积分数为１０％的甲醛，随后立即将灌注液缓慢并保持一定压力地灌入。灌注后结扎血管，取下胸腺，然后泡入体积分数为１０％甲醛中固定１～２ｄ。胸腺微血管透明标本制作：固定后的胸腺用体积分数为１０％的Ｈ２Ｏ２漂白１～２ｄ，光照催化，漂白后用流水洗净。使用经典的冬青油透明法透明：梯度脱水方法参照解剖学试验技术，取出标本后切成约１５０μｍ的透明厚片，浸泡在冬青油中用解剖显微镜观察。
4）苏木精：－伊红染色切片制作常规ＨＥ染色。
5）图像观察及处理：从每组制得的胸腺切片中随机抽取１０张，在显微镜下于每张切片上随机选择５个视野，利用图像分析系统，测定小叶间动、静脉直径，各级毛细血管直径和微血管面积密度，前３者每个视野测定４个值，再取其平均值。
6）数据统计：分析统计结果均用ｘ?±ＳＤ表示，各统计结果均采用ＳＰＳＳ１７０进行分析。单因素方差分析采用Ｏｎｅ?ｗａｙＡＮＯＶＡ模块，组间比较采用ＬＳＤ法。
结果与分析
1.胸腺微循环观察
1)鸡胸腺血管供应：试验观察到鸡的胸腺位于颈部气管两侧皮下，与颈浅静脉、迷走神经、迷走动脉等包在同一个筋膜鞘内。左右各７叶，共１４叶，颜色粉红（甲醛固定后颜色呈灰白）。胸腺的主要血液供应来自于迷走动脉，这是一条起自颈总动脉干的细小分支，分布至颈部内脏和颈中段的被皮，沿途再分支为胸腺供应血液。迷走动脉上升至颅底与枕动脉发出的降支吻合。流出左右两侧胸腺的静脉分别汇入左右颈静脉，在胸腔入口处与锁骨下静脉汇合成左右前腔静脉。流出胸腺的静脉，有的直接汇入颈浅静脉，有的则汇入到从皮肤收集静脉血液的分支中，再并入颈浅静脉。
2)微循环动态观察：本试验鸡的胸腺平均厚度为２６ｍｍ，通过活体微循环显微镜观察到胸腺小动脉、分支毛细血管、网状毛细血管、小静脉等（图２Ａ）。微血管管径粗细不一（图２Ｂ）。常能观察到血管的吻合支（图２Ｃ）及微血管的线流、粒流和线粒流（图２Ｄ）。细动脉分支形成毛细血管，管径细（约４～６μｍ），走行长而直，形状刚健，血流快。分支毛细血管注入网状毛细血管，互相交联，走行弯曲，网状毛细血管管径较分支毛细血管粗（约５～８μｍ），血流较慢，汇集入集合毛细血管。集合毛细血管管径较粗（约８～１２μｍ），走行弯曲，外观柔软，途径长短不一，血流较网状毛细血管快，注入细静脉（图２Ａ，２Ｂ，２Ｅ）。
3)鸡胸腺组织结构观察：ＨＥ染色切片观察到每叶胸腺的被膜结缔组织向腺体内发出许多膈，将胸腺分隔成许多小叶，血管随其进入胸腺内。每个小叶可分为皮质和髓质（图３Ａ）。皮质浓染而髓质淡染，鸡胸腺中不易找到像哺乳动物那样典型的胸腺小体。试验鸡未经放血处理，胸腺中血管内仍留有红细胞，易于观察血管大致位置。管径较大的血管主要分布在小叶间和皮髓质交界处，在皮质中毛细血管密度明显大于髓质中毛细血管密度（图３Ｂ）。
4)鸡胸腺的微血管分布：试验结果显示来自颈总动脉分支的迷走动脉，与颈浅静脉、迷走神经和胸腺链包裹在同一筋膜鞘中，沿途分支的主干供给颈部皮肤上的血管，发出小分支到胸腺的中央部位，进而分支成血管树穿透实质形成毛细血管网。每个独立的胸腺小叶有２条动脉分布。逐渐分支的小动脉沿着皮髓质交界处，注入到皮质和髓质的毛细血管中。而另一类皮质动脉，进入胸腺后，其分支到皮质的毛细血管中。也发现一些发卡状的小动脉，起源于髓质动脉，并且供应皮质的毛细血管，在动脉和静脉血管之间起到通路作用（图４Ａ）。观察发现皮质中的毛细血管比髓质中的分布更为稠密（图４Ｂ）。皮质小动脉呈放射状从皮髓质交界处向外皮层延伸，并汇入到皮质边缘的小静脉中。在外皮层，许多皮质小动脉呈现螺旋、弯曲状（图４Ｃ），也流通到皮质表面的小静脉中。但髓质小动脉则形成毛细血管网络，与静脉连通（图４Ｄ）。胸腺中静脉系统：髓质比皮质中的分布更密（图４Ｄ）。在胸腺髓质，尤其是皮髓质交界处，常常观察到弯曲迂回的小静脉（图４Ｂ）。这些小静脉起源于皮质或髓质，形成髓质静脉，并与小叶间静脉连接。这些静脉的血管内皮表面，能够观察到淋巴细胞穿透内皮细胞层（图４Ｅ）。在胸腺表面上，许多皮质的静脉收集了皮质中毛细血管的血流，并汇入到小叶间静脉（图４Ｆ）。这些皮质静脉多数与穿过皮质隔或实质的髓质静脉汇合或吻合。皮质的血管不存在血管周围间隙。
讨论与结论
1.关于本试验所采用的微循环研究方法
本试验主要选用了组织切片和灌注墨汁的方法进行形态学研究，用活体微循环观察仪进行生理学研究。镜下观察组织切片方法，可以了解微血管的断面形态、结构，能够观察微血管和其周围组织的关系。但一般组织切片仅能反映约５μｍ厚的断面结构，不能了解微血管立体分布、走行。为了补救组织切片方法的缺陷，可以采用连续切片，逐片观察、描绘、复制的方法。这种方法，除具有组织切片方法的优点外，又能描绘出微血管的立体分布、走行和相互关联。早期的研究利用这种方法认识了一些脏器，如脾脏等的微血管的分布形态。但也存在着工作量过大，缺少真实感等缺陷。因而在本试验中，选用灌注墨汁后制作透明标本的方法弥补了组织切片观察的片面性。在血管中注入墨汁充盈微血管，再将组织透明，便可以在解剖镜下清晰地观察到微血管的分布、形态以及微血管的相互关系。理想的血管内灌注液应具备接近血液的黏稠度和较好的流动性。试验采用质量浓度为００５ｇ／ｍＬ明胶墨汁。灌注后选用冬青油与苯甲酸甲酯混合液透明组织，透明效果好。胸腺浸泡在透明液中，在解剖镜下能清晰、直观地观察到微血管的分布、走行、形态，以及细动脉、毛细血管、细静脉的相互关系等。试验证明，这种传统的墨汁灌注透明法操作简单、所需的设备普通常见，不失为一种比较实用的微循环形态学研究方法。试验采用活体微循环显微仪进行直接的活体微循环观测。本试验在原有的显微镜落射光源的基础上，在底部添加透射能力强、亮度大的冷光源，能较为清晰地观察到血流动态，转动微调时，能观察到不同高低层次的微血管。但动物不可能完全地安静，试验中，观测部位在鸡的颈部，鸡只的呼吸活动等会对活体观察造成影响，不容易得到清晰连贯的微循环录像，这也是本试验所欠缺的地方。总的来说，本试验从宏观到微观，从静态到动态比较详细地观察了鸡胸腺微循环。