2021-4-9 | 医学
方法
分组及给药：取健康大鼠60只，随机均匀分成空白组、模型组、田七跌打风湿膏组、白酒组、大、小剂量半夏酒糊组，每组10只。实验前1d将大鼠右后肢脱毛，并测量其周长，实验当天除空白组外，其余各组将大鼠固定，用1根直径为3cm、高25cm的空心管置于大白鼠右后肢软组织上，把1根重约1000g钝头铁杵，自空心管顶端自由落体击中大鼠右后肢软组织，造成明显皮下出血及肿胀的非开放性软组织损伤模型。造模成功后测量各组大鼠右后肢周长并进行症状积分，然后在损伤部位给予相应药物。田七跌打风湿膏组敷田七跌打风湿膏，厚度2mm，约0.25g/cm2；大、小剂量半夏酒糊组分别以药棉吸附浓度0.25g/mL、0.15g/mL糊剂后湿敷，用量约0.5mL/cm2；白酒组给予0.25g/mL白酒淀粉糊，用量约0.5mL/cm2；空白组、模型组以药棉蘸0.9%氯化钠溶液湿敷，用量约0.5mL/cm2，给药后均以保鲜膜覆盖胶布固定，每天保持药物接触皮肤6h，6h后以0.9%氯化钠溶液洗净药物，每日1次，共5d。观测指标：每天观察并记录第1、3、5天伤肢症状积分和周长变化（周长变化=用药后周长-用药前周长，小于0按0记）。大鼠外伤血瘀症状积分评定标准：①皮下瘀血：多量块状计2分；少量点状计1分；无瘀血者计0分。②肌肉肿胀：明显肿胀计2分；稍有肿胀计1分；无肿胀者计0分。③肌肉颜色：紫暗色深计2分；暗红色浅计1分；色泽正常计0分。在给药后第6天早上眼眶取血，检测血液流变学指标，取大鼠伤肢软组织固定于10%甲醛溶液中，常规病理切片，进行病理观察。统计学方法：数据分析用SPSS13.0forWindows统计软件包进行数据资料的统计学处理，计量资料用x-±s表示，等级资料采用Ridit检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
对大鼠外伤血瘀模型损伤部位的肉眼观察从表1可以看出，与空白组比较，模型组大鼠右后肢损伤症状积分均显著升高（P<0.01），说明造模成功；造模第1天，与模型组比较，各组大鼠右后肢损伤症状积分均无显著性差异，说明分组均匀；自造模第3天起，与模型组比较，大剂量半夏酒糊组、田七跌打风湿膏组、小剂量半夏酒糊组均可显著降低大鼠右后肢损伤症状积分（P<0.01，P<0.05）。白酒组大鼠右后肢损伤症状积分没有明显的影响。
对大鼠外伤血瘀模型右后肢周长的影响从表2可以看出，与空白组比较，模型组大鼠造模后右后肢周长变化均显著性升高（P<0.01），说明造模成功。第1天与模型组比较用药各组右后肢周长变化无显著性差异，说明分组均匀。第3、5天，与模型组比较，大、小剂量半夏酒糊组和田七跌打风湿膏组右后肢周长变化值均显著减小（P<0.05，P<0.01），白酒组对大鼠造模后右后肢周长变化没有明显的影响。
对大鼠外伤血瘀模型血液流变学的影响从表3可以看出，与空白组比较，模型组的血液流变学各项指标均显著升高（P<0.01），说明造模成功；与模型组比较，大剂量半夏酒糊组和田七跌打风湿膏组可显著降低血液流变学各项指标（P<0.01）；小剂量半夏酒糊组可显著降低全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、全血高切还原黏度、全血低切还原黏度、红细胞聚集指数、全血低切相对黏度（P<0.01），可明显降低红细胞刚性指数、全血高切相对黏度（P<0.05）。白酒组对大鼠血液流变学各项指标没有明显的影响。
对大鼠外伤血瘀模型病理组织学的影响大鼠右后肢皮肤血瘀组织的病理组织学观察结果：空白组动物皮肤的角质层、鳞状细胞层、皮下组织中的毛囊、结缔组织均正常；模型组动物皮肤的角质层、鳞状细胞层变薄，皮下组织可见水肿和大量的血浆渗出，毛囊与结缔组织散落呈片状，可见少量的纤维增生；田七跌打风湿膏组动物的皮肤表皮的各层结构和真皮层结构中的毛、毛囊、汗腺、皮脂腺明显的恢复；白酒组动物皮肤的角质层、鳞状细胞层稍有增厚，皮下组织水肿和血浆的渗出明显减少，毛囊与结缔组织破碎；大剂量半夏酒糊组动物皮肤的角质层、鳞状细胞层增厚、皮下组织中的水肿和血浆的渗出消失，有少量的炎细胞渗出；小剂量半夏酒糊组动物皮肤的角质层、鳞状细胞层变薄和破损，皮下组织中的还有少量的水肿和血浆的渗出，毛囊、结缔组织基本正常。经Ridit检验，与空白组比较，模型组出现显著的病理组织损伤（P<0.01），说明造模成功；与模型组比较，田七跌打风湿膏组、大、小剂量半夏酒糊组均可显著的改善动物的病理组织损伤（P<0.01），白酒组减轻局部病变作用不明显。
讨论
血瘀证是指人体内血行不畅、拥塞血脉或血溢脉外、停积为瘀的症候。外伤血瘀是在外力作用下如杠杆挤压或悬垂重物砸伤而成的血瘀证模型，原理来源于《黄帝内经》“若有所堕坠，恶疝，在内而不去则气血凝结”的论述[3]。肌肉丰富的部位受到外力的撞击或挤压，由于局部缺血会对机体引起局部及全身的双重反应，表现为固定疼痛、拒按、功能性障碍、病理性血肿及血液流变学的改变等，还影响了血瘀患者的运动[4-5]。
本实验采用定量化重物击伤动物单侧后肢的方法造动物外伤血瘀模型，以皮未破而内损为度[6]。该方法常见，简便易行，成功率高。在地震和工伤事故中重物击伤是一种常见的造成血瘀的原因，动物模型是当代医学研究中的重要技术平台，应用这一造模方法对外伤血瘀证进行研究具有现实的意义。本实验通过对模型大鼠右后肢损伤症状积分、右后肢同部位周长差、血液流变学和病理变化[7]指标对半夏酒糊疗效进行评价，大鼠右后肢损伤症状积分、右后肢同部位周长差变化指标可直观反映出损伤部位病变程度，指标观测方法操作简单方便；血液流变学是血瘀状况的重要观察指标，血液流变性、血流动力学变化与血瘀形成具有相关性[8-9]；病理组织学变化可反映损伤组织皮肤炎细胞侵润程度和愈合情况。
实验结果显示，大剂量半夏酒糊组可显著降低大鼠第3、5天损伤症状积分、右后肢造模前后周长变化，可显著降低全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、全血高切还原黏度、全血低切还原黏度、红细胞聚集指数、全血低切相对黏度、红细胞刚性指数、全血高切相对黏度、红细胞变形指数，显著改善大鼠病理组织损伤；小剂量半夏酒糊组可明显降低大鼠第3、5天损伤症状积分、显著降低右后肢造模前后周长差，小剂量半夏酒糊组可显著降低全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、全血高切还原黏度、全血低切还原黏度、红细胞聚集指数、全血低切相对黏度，可明显降低红细胞刚性指数、全血高切相对黏度，可显著改善大鼠病理组织损伤。提示半夏外用对外伤血瘀具有好的疗效，且其疗效以大剂量半夏酒糊组为优。