仿生化提取人参皂苷的初步研究

摘  要：采用一种与人体胃生理学环境相接近的体外模拟试验条件提取中药化学成分。以人参超微粉为原料，分别以仿生溶媒及水作为提取溶剂，置37℃水浴中，搅拌提取1小时，经正丁醇萃取分离，得人参皂苷类成分。采用高效液相色谱法，测定二种提取物中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量之和，并分析高效液相色谱图特征，结果仿生化提取物中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量之和高于水提取物，并且仿生化提取物色谱图中显示有新成分产生。
关键词：人参皂苷； 仿生化；提取； 高效液相色谱法
    人参为五加科植物人参Panax  ginseng  C. A. Meyer.的干燥根及根茎，人参皂苷为人参主要成分之一。传统溶剂法以水、乙醇等亲水性溶剂作为提取溶剂，采用煎煮法、渗漉法、回流提取法等方法进行提取，近年来许多新的提取技术用于人参皂苷提取，如超声提取法、微波提取法、超临界二氧化碳提取法及超高压提取法等[1][2]。上述提取方法的原理主要基于化学浸提的“相似者相溶”原则而进行的，提取溶剂、条件与人体消化系统的生理条件有很大差别，因此得到的“有效成分或部位”存在体外有效，但进入体内却无效的现象，而有些在体外无效的成分却被作为杂质弃去或根本没有从中药中提取出来，但这些成分可能在体内胃肠液作用下发生转化或代谢，而其转化的成分或代谢产物具有良好活性，而且易于被吸收入血发挥作用，因此传统方法筛选有效成分的效率很低，浪费巨大。基于口服药物的体内运转过程，本研究提出仿生化提取构想，即建立一种与人体胃肠生理学环境相接近的胃肠道模拟法，提取条件较化学浸提法更接近人体真实的胃肠生理条件，提取溶剂依据胃液及肠液组成，人工配制成系列提取溶媒，提取温度在37℃，搅拌动态提取。实际上国外在胃肠系统的体外模拟实验已成为一种非常有效的评估污染物有效性的方法，目前国际上已有十余种胃肠模拟方法[3]。本次研究以人参超微粉为原料，分别以仿生溶媒和水为提取溶剂，以人参皂苷Rgl和人参皂苷Re含量之和为考察指标，提取人参皂苷类成分，为仿生化提取中药化学成分可行性提供科学依据。
    一、材料与方法
    1.1 材料与试剂
    人参药材采于吉林省抚松市，经长春中医药大学中药鉴定室鉴定为五加科植物人参Panax Ginseng C. A. Mey. 的干燥根，粉碎成超微粉（300目），备用。人参皂苷Re对照品（批号110754-200822）、人参皂苷Rg1对照品（批号110703-200221），供含量测定用 购于中国药品生物制品检定所；胃蛋白酶（1:3000  上海源叶生物科技有限公司）；乙腈（美国Fisher,色谱纯）；水为蒸馏水（实验室自制）；其他试剂均为分析纯。
    1.2 仪器
    岛津LC-10AT高效液相色谱仪 ；检测器：SPD-10 Av；三用紫外分析仪ZF-6（上海嘉鹏科技有限公司）；BMF-6超微粉碎机（济南倍力粉工程有限公司）；飞鸽 LXJ-ⅡB低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂）；中兴 DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；7321型电动搅拌机调速器（上海标本模型厂）。
    1.3 试验方法
    1.3.1仿生化提取及水提取方法
    取人参药材，60℃真空干燥，超微粉碎，过300目筛，备用。仿生提取溶媒由0.2%氯化钠、0.32%胃蛋白酶及0.7%盐酸配制成溶液。
    称取人参超微粉4.0g，加入仿生溶媒100ml，置37℃水浴中，搅拌，提取1小时，离心，上清液用水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇液，减压回收，低温真空干燥，得人参仿生化提取物。
    称取人参超微粉4.0g，加水100ml，置37℃水浴中，搅拌，提取1小时，离心，上清液用水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇液，减压回收，低温真空干燥，得人参水提取物。
    1.3.2 人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量测定方法[4]
    1）色谱条件  色谱柱：Zorbax XDB-C18(4.6mm×250mm，5m)；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（20:80）；流速：1.0ml•min－1；检测波长：203nm；柱温：室温。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于6000。
    2）对照品溶液制备  精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含人参皂苷Rg1 0.24mg、人参皂苷Re0.36mg的混合对照品溶液，摇匀，即得。
    3）标准曲线的制备
    分别精密吸取2l 、5l 、10l、15l、20l对照品溶液，注入液相色谱仪，记录其峰面积积分值，分别以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re浓度（g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程：人参皂苷Rg1为Y=1323.7X-15395,r=0.9998；人参皂苷Re为Y=1659.4X+5200.8,r=0.9999。结果表明，人参皂苷Rg1在0.48～4.8g，人参皂苷Re在0.72～7.2g范围内呈良好的线性关系。液相色谱图见图1。.
    二、结果与分析
    2.1 不同提取方法提取率的比较
    分别取人参皂苷仿生化提取物及水提取物适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇超声溶解，稀释至刻度，制成每1mg/ml的溶液，摇匀，经微孔滤膜（0.45m）滤过，作为供试品溶液。分别精密吸取二种供试品溶液10l，注入液相色谱仪，依上法测定，得峰面积，外标一点法计算含量，并计算提取率。计算结果见表1，液相色谱图见图2、图3。.
    2.2 结果分析
    含量测定结果表明，以人参皂苷Rg1与人参皂苷Re含量之和为指标，提取人参中皂苷类成分，仿生化提取法的提取率高于相同条件下以水作为提取溶剂；并且通过比较高效液相色谱图，仿生法得到的提取物色谱图在人参皂苷Rg1和人参皂苷Re前后分别出现新的色谱峰，提示在该提取条件下可能有成分转化或是未被水提取出来的成分，对该成分的确定有待进一步研究。